Odlomak

.UVOD

Svaki presjek, bez obzira na koji način je napravljen, da li žiletom, sječen na mikrotomu od svježeg ili fiksiranog materijala, ili je napravljen iz parafinskog kalupa moguće je obojiti i napraviti privremeni ili trajan preparat. Presjeke je moguće obojiti na različite načine, različitim bojama. U ovom seminarskom radu biće detaljnije objašnjeno na koji način je moguće bojiti presjeke na različite načine, kao i postupak pripremanja glicerin želatinskih preparata i skvoš preparata. Ciljevi ovog rada jesu:
1. Upoznati studente i učenike sa hemijskim supstancama koje se koriste kao i bojama i njihovim dejstvom prilikom pravljenja preparata, kao i mjerama opreza prilikom korištenja.
2.Upoznavanje studenata i učenika sa tehnikama izrade privremenih i trajnih preparata, postupcima pripremanja i načinima bojenja različitim bojama.
3. Ukazati na to da je sa malim materijalnim ulaganjem moguće napraviti biljni preparat.
2.BOJENJE PREPARATA NA MIKROTOMU BEZ INKLUZIJE U PARAFIN

Bilo koji presjek napravljen različitim tehnikama sječenja i od različitog materijala, moguće je obojiti i napraviti privremeni ili trajan preparat. Postoji i tehnika bojenja presjeka od materijala koji nije inkluziran u parafin. Ovakva tehnika zahtjeva da se presjeci napravljeni slobodnom rukom uz pomoć žileta ili na mikrotomu od svježeg biljnog ili fiksiranog materijala sprovedu kroz seriju alkohola i boje na predmetnom ili sahatnom staklu. Tehnika bojenja na predmetnom staklu se koristi ako je u pitanju 1-2 preparata, dok se sahatna stakla koriste ako ih je više. Proces bojenja preparata zahtjeva da preparati prođu kroz serije alkohola i boju, a da se pri tome ne oštete ili ne osuše. Postoje dva najjednostavnija načina:
1.Presjeci se finom četkicom prebacuju iz jednog u drugo sahatno staklo. Ovakav način rada zahtjeva pripremu onoliko sahatnih stakala kroz koliko različitih agenasa materijal prolazi sve do konačnog uvođenja u kanade balzam ili neku drugu materiju.
2.U toku rada presjeci mogu da ostanu u jednom sudu, samo ako se pipetom izvuče ili odlijevanjem ukloni reagens u kome su stajali, i poslije ispiranja dodaje se svježa porcija odgovarajućeg reagensa.
Ovakva način rada ne zahvtjeva mnogo materijalnog ulaganja, svega nekoliko reagenasa i žileta, alkohol 95% ili apsolutni, boja po izboru 5-10 g, nekoliko odgovarajućih sudova, litar ksilola, kanada balzam-1 tuba.
Šafranin-vodeno plavo je jedna od čestih kombinacija koja se koristi pri ovakvom načinu rada (Slika 1.).

 

Presjeci napravljeni od fiksiranog materijala odmah se stavljaju u šafranin u kome ostaju 10-30 minuta, a ponekad i 24h. Nakon šafranina, presjeci se diferenciraju u 50% alkoholu i prenose u boju u vodeno plavo. U boji ostaju do 10 minuta, a zatim se prenose u 95% alkohol. Diferenciranje prebojenih presjeka se vrši u zakiseljenom alkoholu. Zakiseljen alkohol predstavlja rastvor 100 ml 95% alkohola sa kap-dvije sone kiseline. Kada se postigne odgovarajući ton boje, presjek se ispere više puta čistim alkoholom. Diferenciranje se vrši sve dok se alkohol boji, odnosno dok se ne ispolje jasne razlike u obojenosti tkiva. Šafranin sva odrvenjena tkiva boji u crveno, a celulozni i drugi ne odrvenjeni zidovi biće plavi do vodeno plavi.
Dehidratacija presjeka se vrši u apsolutnom alkoholu, koji se više puta mijenja. Važno je da dehidratacija bude potpuna, inače će se presjeci pri prenošenju u ksiol zamutiti. U ksiolu presjeci ostaju 5-10 minuta. Iz ksiola se presjeci prenose na predmetnu ploču i stavljaju u kanade balzam, pokrivaju se pokrovnom pločicom i ostavljaju na sušenje nekoliko dana. Nakon sušenja trajni preparat je završen.

No votes yet.
Please wait…

Prijavi se

Detalji dokumenta

Više u Biologija

Više u Seminarski radovi

Više u Skripte

Komentari