Napomene o opštem poglavlju
Opšta revizija poglavlja je nastala posle višegodišnjeg iskustva.
Velike promjene su u :
Definicijama
.
IUPAC terminologija se koristi kad je god to moguće. Dodatne definicije su uvedene,
posebno za parametre i veličine isključene hromatografije, i zapremime zadržavanja.
(zajedno sa metodam za određivanje).
Odnos SIGNAL-ŠUM
Signal-šum odnos , posmatranje prozora na baznoj liniji, u osnovi је smanjeno na
udaljenost jednaku vremenu potrebnom za postizanje širine, na pola visine od vrha, da
samo pokriju kratko vrijeme šuma.
Podobnosti sistema
.
Usvojen je zahtjev da vrh simetrije bude 0.8-1.5 I da se odnosi na vrh hromatograma
dobijenog sa referentnim standardima za kvantifikaciju i da se zahtjevi za ponovljivost
odnose samo na aktivnu supstancu, gdje je vrijednost za čistu supstancu 100%.
Zahtjev za granicu detekcije је izbrisan, on je suvišan. Pridržavanje kriterijuma
podobnosti do kraja hromatografskog procesa je suvišno.
Podešavanju hromatografskih uslova.
Izokratsko i gradijentno eluiranje u tečnoj hromatografiji se sada posmatra razdvojeno, za
oba procesa, dodata je formula za podešavanje protoka, gdje se kolone različitih
dimenzija od onih propisanih, koriste i dozvoljeno je prilagođavanje temperature kolone ,
sada ustaljeni izraz više je značajan kao apsolutan termin ( +/- 10
0
C za izokratsko i + / -
5
0
C za gradijentno eluiranje), to jest u procentima.
Za gradientno eluiranje, moguće su samo male korekcije. Vrijeme gradientne tačke može
se prilagoditi, uzimanjem u obzir razlike između zapremina zadržavanja između sistema
koji se koristi pri razrađivanju metoda I sistema koji je se koristi u praksi, kada ima
isokratski protok.
Hromatografske separacione tehnike su višestepene separacione metode kod kojih se
komponente uzorka raspodjeljuju između dvije faze, od kojih je jedna stacionarna, a
druga mobilna. Stacionarna faza može biti čvrsta ili tečna, podržana na čvrstom ili gel
nosaču. Stacionarna faza može biti pakovana u koloni, kao širi sloj, ili distribuirana kao
film. Mobilna faza može biti gas, tečnost ili tečnost pod visokim pritiskom. Razdvajanje
može biti zasnovano na adsorpciji, raspodjeli prema masi, razmjeni (izmjeni ) jona, ili se
zasniva na razlikama u fizičko-hemijskim osobinama molekula kao što su veličina, masa,
zapremina.
1
Ovo poglavlje sadrži definicije i kalkulacije zajedničkih parametara i opšte važeće
zahtjeve za podobnost sistema.Principi razdvajanja, aparatura i metode dati su u sledećim
opštim poglavljima:
-Papirna hromatografija ( 2.2.26 )
-Tankoslojna hromatografija ( 2.2.27 )
-Gasna hromatografija ( 2.2.28 )
- Tečna hromatografija (2.2.29)
-Ekskluziona hromatografija (2.2.30)
-Superkritična tečna hromatografija (2.2.45)
Definicije
Kriterijumi prihvatljivosti i pogodnost sistema u monografijama su postavljeni koristeći
parametre koji su dolje definisani. Sa nekih oprema, određeni parametri
,kao što je odnos signal-šum, rezolucija mogu se izračunati pomoću programa koji su dati
od strane proizvođača opreme.Odgovornost korisnika je da osigura da su obračunske
metode koje se koriste u softeru ekvivalentne zahtjevima Evropske Farmakopeje, kao i
sve potrebne korekcije, ako to nije slučaj.
Hromatogram
Grafički prikaz ili neka druga prezentacija odgovora detektora, koncentracije otpadnih
vode ili drugih količina koristi kao mjera koncentracije otpadnih voda, u odnosu na
vrijeme ili zapreminu. Idealizovani hromatogrami su predstavljeni kao niz Gausovih
vrhova na osnovici.
(slika 2.2.46.-1)
2
V
m
-
zapremina mobilne faze
Faktor zadržavanja komponente se može utvrditi iz hromatograma pomoću izraza:
k=
( tr – tm )
tm
Ukupno vrijeme mobilne faze
t
t
Za isključenja po veličini u hromatografiji, retenciono vrijeme komponente čiji su
molekuli manji od najmanjih gel pora.
Ukupna zapremina mobilne faze
V
t
Za isključenja po veličini u hromatografiji, retenciona zapremina komponente čiji su
molekuli manji od najmanjih gel pora. Može se izračunati iz ukupnog vremena mobilne
faze I koeficijenta toka (F) u mililitrima po minuti:
V
t
= t
t
x F
Retenciono vrijeme ne zadržavanih komponenti ( jedinjenja )
t
0
Za isključenja po veličini u hromatografiji, retenciono vrijeme komponente čiji su
molekuli veći od najvećih gel pora.
Retenciona zapremina ne zadržavanih komponenti ( jedinjenja )
V
0
Za isključenja po veličini u hromatografiji, retenciona zapremina komponente čiji su
molekuli veći od najvećih gel pora. Može se izračunati iz retencionog vremena
nezadržive komponente I koeficijenta toka (F) u mililitrima po minuti:
V
0
= t
0
x F
Distribuciona konstanta
К
0
Za isključenja po veličini u hromatografiji,karakteristike izlučivanja iz komponente u
određenoj koloni mogu biti dati preko distributivne konstante (takođe poznata I kao
distributivni koeficijent), koja se izračunava iz izraza:
K
0
= ( t
R
– t
0
) / ( t
t
– t
0
)
4
Slika 2.2.46.-2
Faktor razdvajanja
R
F
Faktor retardacije (poznatri kao retencioni faktor Rt), koji se koristi u planarnoj
hromatografiji, je koeficijent distance od tačke aplikacije do centra samog mjesta I
distance koju pređe rastvor od tačke aplikacije.
R
F
= b/a
b= migraciona distanca analita
a= migraciona distanca prednjeg rastvora
5
