Srednja medicinska škola “Hipokrat”
Maturski rad
Tema: Laboratorijsko dokazivanje biomolekula u uzorku. Hemijski
pregled urina.
Profesor-
mentor: Učenik:
Danijela
Kovačević Nađa Lončar
Septembar, 2017.
Sadržaj:
1.
Određivanje holesterola u serumu
.........................................1
2.
Određivanje triglicerida u serumu
..........................................2
3.
Određivanje ALT
-a u serumu metodom Rajtman-Frankel......3
4.
Određivanje glukoze u serumu
...............................................3
4.1. Redukcione metode..................................................3
4.2. Hemijske metode......................................................4
4.3. Enzimske metode......................................................4
5.
Određivanje kreatina u serumu
..............................................6
6.
Određiv
anje ureje metodom po Berthelotu...........................6
7.
Određivanje
ukupnih proteina metodom po Biuretu.............7
8.
Određivanje kalcijum
a kompleksometrijskom titracijom.......8
9.Hemijski pregled urina............................................................9
9.1.
Dokazivanje hlorida u mokraći
................................... 10
9.2.
Kvalitativno dokazivanje sulfata u mokraći
.................11
9.3.
Kvalitativno dokazivanje indikana u mokraći
.............12
9.4. Ispitivanje ureje..........................................................12
9.5. Dokazivanje belančevina u mokraći
...........................13
9.6
. Dokazivanje glukoze u mokraći
..................................14
9.7.
Dokazivanje ketonskih tela u mokraći
.......................14
10.Pregled sedimenta urina.........................................................14
11.
Određivanje alkalne fosfataze
.................................................16
12.
Određivanje mokraćne kiseline
...............................................17
12.1. Redukcione metode..................................................17
12.2. Enzimske metode..................................................... 18
12.3. HPLC tehnike.............................................................18
Literatura........................................................................................19
2
2.
Određivanje triglicerida u serumu
Trigliceridi
se enzimski razgrađ
uju pod dejstvom lipoprotein lipaze na glicerol i masne kiseline.
Zatim se glicerol fosforiliše sa ATP
-om pod dejstvom glicerol kinaze u glicerol-3-fosfat i ADP.
Glicerol-3-fosfat oksiduje u prisustvu kiseonika i pod dejstvom glicerol-3-fosfat oksidaze
oks
idiše do dihidroksiaceton fosfata
i vodonik peroksida. Vodonik-peroksid peroksidazom
prelazi u vodu i molekulski kiseonik. Kiseonik sa fenolom i paraaminoantipirinom daje
kinoneimin ružičaste boje koji apsorbuje na 490
-520 nm.
Slika 2. Epruvete
Izvođenje :
u tri epruvete (Slika 2)
. Proba sadrži serum, standard poznati rastvor, dok blank sadrži
vodu i služi za podešavanje aparata na nulu. U sv
e tri epruvete dodajemo reagens. Epruvete
promuć
kati i
ostaviti na sobnoj temperaturi. Či
tati ekstinkcije na 490-520 nm. Koncentracija
probe računa se preko formule :
C
p
=C
s
x
??
??
Preko poznate koncentracije i ekstinkcije standarda i izmerene ekstinkcije probe dobijamo
koncentraciju probe tj.seruma. Rezulta
ti se računaju u jedinici mmol/
l.
Referentne vrednosti za trigliceride je < 1,7 mmol/l.
3
3.
Određivanje ALT
-a u serumu metodom Rajtman-Frankel
Alanin-aminotransferaza (ALT/GPT) katalizuje prenos amino grupe sa alanina na oksiglutarat
stvarajući
glutamat i piruvat. Piruvat se zatim redukuje u laktat dejstvom enzima laktat
dehidrogenaze i NADH+ koenzima. Merimo ekstinkciju NADH+ , koja proporcionalno ukazuje na
aktivnost ALT-a. NADH+ apsorbuje na 340 nm.
Izvođenje: Radni
reagens
pripremamo mešanjem četiri zapremine prvog
i jedne zapremine
drugog reagensa
. Ostavljamo četiri nedelje
zaštićeno od svetlosti
i zatim izvodimo eksperiment.
Pipetiramo direktno u kivetu radni reagens i serum, zatim pr
omešamo
i merimo ekstinkcije na
340 nm. Ekstinkcije merimo 3 minuta na svaki minut. Srednju vrednost ekstinkcija
množimo
odgovarajućim fakto
r
om u zavisnosti od temperature izvođenja eksperimenta
i dobijamo dejstvo
enzima izraženo u IU/L. Vrednost Si sistema za dejstvo enzima dobijamo množenjem
izračunatog
IU/L sa faktorom 0,01667. Dobijena jedinica je
µkat/L.
IU/L =
ΔE/min x faktor
µkat/L = IU/L x 0,01667
IU predstavlja onu količinu enzima za 1 µmol supstrata u minuti.
Klinički značaj aktivnosti enzima ALT povezan je sa mnogim organima i sistemima.
Obzirom da je njegova aktivnost
transaminacije najznačajnija u jetri, prethodno iznetim
postupkom
moguće je utvrditi postojanje toksičnog hepatitisa.
4.
Određivanje glukoze u s
erumu
Analize koje ukazuju na nivo šećera u krvi su veoma značajne jer mogu ukazati na vrlo rane
stadijume dijabetes melitusa
koja je široko rasprostranjena bolest u populaciji. Serumski nalaz
glukoze se krece u referentnim vrednostima od 4,2 mmol/l do 6,4 mmol/l.
Metode koje poznajemo su redukcione, hemijske i enzimske.
4.1.Redukcione metode
Najstarije su, koriste se
redukujućim svojstvima glukoze, pri čemu glukoza može
da redukuje
različite jone metala.
4.1.1. Felingova metoda
–
glukoza redukuje jone s
rebra pri čemu u baznoj sredini
nastaje crveno-
mrki talog bakar(I)-
oksida čija je količina p
r
oporcionalna količ
ini glukoze u uzorku. U reagensu se
nalazi tartarat.
4.1.2. Tolensova metoda
–
glukoza redukuje jone srebra, nastaje elementarno srebro.
