Prirodno-matematički fakultet
Univerzitet u Kragujevcu
Metode izolacije i uspostavljanje primarne ćelijske kulture.
Tumor sferoidi i metode ispitivanja invazivnosti i migratornog
potencijala tumorskih ćelija
Mentor: Student:
Doc. dr Snežana Marković Jovanović Milena 5015/2016
Kragujevac, 2018. godine
1. Izolacija i uspostavljanje primarne ćeljske linije
Kolorektalni kancer, poreklom iz epitela debelog creva je jedan od najučestalijih
malignih bolesti kod ljudi. Uspešno savladavanje bolesti kao što je humani kolorektalni
kancer mnogo više zavisi od biologije individualnog kancera nego od terapije koja se
primenjuje. Tako da se velika pažnja usmerava na biološke i molekularne karakteristike
epitelijalnih tumorskih ćelija kolona.
Uspešna kultivacija ćelija humanog kolorektalnog karcinoma može pružiti korisne
modele u cilju razvoja novih terapija, kao i proučavanja razloga rezistentnosti ovog tipa
kancera na mnoge terapeutike. Dostupne sveže humane ćelije omogućavaju ispitivanja
individualnih svojstava pojedinih tumora.
Rani pokušaji da se uspostavi ćelijska linija humanog kolorektalnog karcinoma su
bili sa malo uspeha, a razlozi tome su mikrobiološka kontaminacija, prekomeran rast
fibroblasta koji ostaju nakon izolacije zajedno sa ćelijama kancera, kao i kompleksni
nutritivni zahtevi. Ovi problemi su delimično prevaziđeni pojačanom upotrebom
antibiotika, izmenjenim sastavom medijuma i selektivnih uklanjanjem fibroblasta.
Serije humanih kolorektalnih adenokarcinomskih ćelijskih linija su uspostavljene iz
svežih uzoraka tkiva koji su odstranjeni hirurškim putem iz pacijenata sa primarnim
tumorima. Nekoliko različitih pristupa za izolaciju i kultivaciju humanih ćelija kancera
kolona su do sada publikovani. U ovom radu se analizira nekoliko različitih tehnika i
metoda izolacije, kao i kultivacije i neophodnih uslova koje zahteva primarna ćelijska linija.
Cilj je da se uspostavi eksperimentalni protokol koji bi omogućio dobijanje vijabilnih i što
čistijih ćelijskih linija kancera kolona i njihovo uzgajanje tako da se održi njihov maligni
fenotip.
Pre samog postupka obrade tumorskog tkiva, potrebno je sakupiti važne podatke o
svakom pacijentu od koga je dobijeno tkivo odstranjeno (broj muškaraca, žena, njihova
starost, da li su bili podvrgnuti terapijama ili ne, tačna lokacija tkiva iz kog je uzorak
odstranjen i drugi).
